尊龙凯时细胞培养指南：A549细胞系

A549细胞系是由Giard DJ于1972年建立的经典人肺癌细胞系，来源于一名58岁白人男性的肺腺癌肿瘤组织。该细胞系现广泛应用于肺癌研究、药物开发及分子机制探讨。其培养条件为气相组成95%空气和5%二氧化碳，温度维持在37℃。A549细胞能够通过胞苷二磷脂酰胆碱途径合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂，并且表现出角蛋白阳性。

细胞传代方法：建议采用1:2的传代比例，每隔2天更换培养液。收到细胞后，请勿立即开启瓶盖，务必检查培养瓶上的细胞名称是否与订单一致，并注意是否有破损或漏液的情况。若未发现异常，可在显微镜下观察细胞生长情况，拍照保存细胞状态（推荐保存40x、100x、200x下的照片），前三天的记录是重要的售后依据。若未提供照片，将默认收到细胞状态良好。

贴壁细胞传代步骤如下：

1. 丢弃培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，在显微镜下观察细胞状态，若大部分细胞变圆并开始脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶进行传代（可分为两个T25瓶），并添加新鲜的完全培养基至每瓶5-8ml，最后将其放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤：采用半换液法或离心换液法，根据具体情况进行细胞分瓶和培养基更换。

细胞冻存及复苏流程：

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，将培养液弃去，并用PBS清洗一次；
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察至细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化。轻轻吹打使细胞脱落，随后转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟；
3. 弃上清，加入1ml的无血清冻存液，混匀后装入冻存管，直接放入-80℃冰箱，24小时后可转入液氮罐。

细胞复苏步骤如下：

1. 从液氮中取出细胞冻存管，迅速在37℃水浴中解冻，待无冰晶后擦拭外壁；
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟；
3. 弃上清，沉淀重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中；
4. 隔天更换为新鲜培养基继续培养。

注意事项：运输过程中，细胞可能因贴壁不牢而脱落，如果脱落较多，可以将培养液收集后进行离心处理，重悬并传代。同时，对于细胞状态的检查和记录非常重要，确保及时和技术人员沟通，以判断责任和处理方案。

如遇细胞出现问题，请在规定时间内提出，具体重发条件包括细胞运输损坏、污染等情况。对于因客户错误操作造成的细胞问题，尊龙凯时将不予重发，敬请谅解。